以特定組織或者細胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA為擴增和測序模板,獲取候選基因的突變位點信息,還可檢測到引起非正常剪切的功能突變位點。
技術(shù)方法:
設(shè)計特異引物進行全長cDNA擴增,后采用美國Life technologies公司的BigDye試劑盒對純化后的擴增產(chǎn)物進行測序(同基因組DNA常規(guī)測序),如果有多種剪切體,先割膠分離純化,然后分別測序。與基因組DNA常規(guī)測序相比,cDNA測序可以大大減少測序反應(yīng)數(shù)目,節(jié)約成本,而且可以檢測到引起非正常剪切的明確的功能突變位點,不管該位點是剪切點突變、同義突變還是內(nèi)含子突變,但是很多情況下,很難獲得目標基因表達的組織樣本,同時也得注意由于嚴重等位基因不平衡表達造成的假陰性結(jié)果。 應(yīng)用領(lǐng)域: 單基因多基因遺傳疾病的基因突變檢測、藥物代謝相關(guān)基因突變檢測、腫瘤相關(guān)基因的體細胞突變檢測等
樣本要求:
以表達候選基因的總RNA反轉(zhuǎn)錄而成的高質(zhì)量cDNA 服務(wù)內(nèi)容:
服務(wù)時間: 通常情況下,<30樣本一個基因全長cDNA測序需20個工作日
檢測實例:
cDNA測序原理圖 |